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更新时间:2024-10-18       点击次数:34

前言


水杨酸,分子式为c7h6o3,是植物柳树皮提取物,是一种天然的消炎药。水杨酸可以杀菌、消炎,从而常被用于对水产动物体表的水霉、鳃霉的剥离分解及伤口修复,水产动物因红斑、皮肤病、打印、赤皮、烂尾、溃烂、腐皮、肤霉、脱粘、白头白嘴、烂鳃、水肿、出血等引起的多种伤口能快速愈合。本品定期使用能有效预防和降低水产品发病率并快速净化水体,从而抑制降解水体中的各种杂菌及病原体,但长期过量使用会造成药物在动物体内富集,人类食用这些水产品会使残留的兽药进入人体,从而影响人体健康。

本文参照《鱼可食性组织中水杨酸残留量的测定 液相色谱-串联质谱法(征求意见稿)》,利用ezsep™hrm-lipid固相萃取柱(300mg/6ml,货号:pz12624) 净化样品,再通过高效液相色谱串联质谱检测进行检测,建立了鱼肉中水杨酸残留量的分析方法。



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实验过程



1.1 仪器与试剂
mprep-spe08手动固相萃取装置,货号:pz0008,北京莱伯帕兹检测科技有限公司;
e.t.氮吹浓缩仪,货号:c020017,北京莱伯帕兹检测科技有限公司;
4500质谱系统,sciex公司;
ezsep™hrm-lipid固相萃取柱(300 mg/6ml,货号:pz12624),北京莱伯帕兹检测科技有限公司;
冷冻离心机,gl-20g-ⅱ,上海安亭科学仪器厂;
乙腈(色谱纯),购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司;
甲酸(分析纯),购自国药集团化学试剂有限公司。

1.2 工作液配制
水杨酸标准物质:100mg/瓶,购自坛墨质检标准物质中心。
水杨酸标准储备液:取水杨酸标准品适量(相当于有效成分约10mg),精密称定,用乙腈稀释至10ml容量瓶中,配制成浓度为1000μg/ml的水杨酸标准储备液。
水杨酸d4标准储备液:浓度为100μg/ml溶剂为甲醇,购自上海安谱实验科技股份有限公司。
水杨酸标准中间液:移取水杨酸标准储备液0.1ml,用乙腈稀释至10ml容量瓶中,配制成浓度为10μg/ml的水杨酸标准中间液。
水杨酸标准使用液:水杨酸标准中间液1.0ml,用乙腈稀释至10ml容量瓶中,配制成浓度为1.0μg/ml的水杨酸标准使用液。
水杨酸d4标准使用液:移取水杨酸标准储备液0.1ml,用乙腈稀释至10ml容量瓶中,配制成浓度为1.0μg/ml的水杨酸d4标准使用液。
依次移取1.0μg/ml的水杨酸标准使用液0、0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.0ml,分别置于10ml容量瓶中并均加入水杨酸d4标准使用液0.2ml,以0.1%甲酸水溶液定容至刻度,得到浓度依次为0μg/l、2μg/l、5μg/l、10μg/l、20μg/l、50μg/l、100μg/l的标准系列工作液,水杨酸d4浓度固定为20μg/l。

1.3 实验部分
1.3.1 样品制备
取鱼肉试样2g,置于50ml聚丙烯离心管中,添加水杨酸d4标准工作液40μl,加5%甲酸乙腈溶液10.0ml,涡旋混匀1min超声提取10min,10000r/min冷冻离心5min,收集上清液5.0ml待净化
1.3.2 固相萃取净化
ezsep™hrm-lipid固相萃取柱(300 mg/6ml,货号:pz12624)用5ml乙腈进行活化,取1.3.1待净化液上样,收集流出液,以e.t.氮吹浓缩仪,40℃氮气浓缩至近干,加1.0ml0.1%甲酸水溶液,涡旋混匀过微孔滤膜后供lc-ms/ms测定。
1.3.1 lc-ms/ms仪器条件
色谱柱:shim-pack velox c18(2.7μm,2.1*100mm);
检测方式:多反应监测(mrm);
流动相:a:0.1%甲酸水溶液;b:乙腈;
流速:0.3ml/min。

表1 流动相梯度洗脱表


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实验结果



表2 加标回收率

图1 标液色谱图

图2 空白样品色谱图
图3 10μg/kg样品添加色谱图

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实验结论



本实验使用ezsep™hrm-lipid固相萃取柱(300mg/6ml,货号:pz12624) 对鱼肉样品进行净化,通过高效液相色谱串联质谱测定其中的水杨酸残留量,该方法的加标回收率在95.0%~105.3%之间,rsd为3.8%,满足标准要求。测试结果说明ezsep™hrm-lipid固相萃取柱(300 mg/6ml,货号:pz12624)能很好的完成方法中的净化工作,并且结果稳定、可靠

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参考文献



[1] 《鱼可食性组织中水杨酸残留量的测定 液相色谱-串联质谱法(征求意见稿)》



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